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CCK-8 Cell Counting Kit细胞增殖与活性检测试剂盒
日期:2017-09-08      新闻作者:百萤生物      阅读量:134

货号品名规格价格
35000Cell Counting Kit(CCK-8试剂盒)100 Tests270
35001Cell Counting Kit(CCK-8试剂盒)500 Tests590
35002Cell Counting Kit(CCK-8试剂盒)1000 Tests1140
35003Cell Counting Kit(CCK-8试剂盒)3000 Tests2750
35004Cell Counting Kit(CCK-8试剂盒)10000 Tests5400


Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是一种基于SST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),SST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。


CCK-8法与其他细胞增殖/活性检测方法比对

检测方法MMT法XTT法WST-1法CCK-8法
甲臜产物的水溶性
产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液
使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用
检测灵敏度很高很高
检测时间较长较短较短最短
细胞毒性高,细胞形态完全消失很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变
试剂稳定性一般较差一般很好
批量样品检测可以非常合适非常合适非常合适
便捷程度一般便捷便捷非常便捷


本试剂盒提供了一种灵敏度高,操作简便,使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的MTT实验相比具有明显的优势:

1.       MTT实验生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO等有机溶剂溶解;而本方法产生的甲臜是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。

2.       与MTT方法相比,本方法线性范围更宽,灵敏度更高。

3.       本方法对细胞无毒性,可以多次测定,选取最佳测定时间。

4.       本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定,实验结果重复性好。

5.       MTT具有毒性,同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒,使用中无需有机溶剂,操作更加安全。

6.       本试剂盒在4°C避光可长期保存,使用无需配制,即开即用。


      本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测,抗肿瘤药物的筛选,细胞增殖的测定,细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有SST-8的CCK-8溶液,即开即用,无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜,可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测,适合大规模,高通量的样品检测。


保存条件:

CCK-8溶液在避光,0-5°C的条件下可以保存一年,如长期保存,可在-20°C下避光保存2年,如需经常使用请将试剂存放在0-5°C,为防止背景值增加干扰实验结果,请勿反复冻融。


使用方法(以 96 孔板为例,其他规格培养板按实际情况安排):

1.       在96 孔板中配置100μL的细胞悬液(通常细胞增殖实验每孔加入100μL2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μL5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养(在37°C,5% CO2的条件下)预培养24 小时。

2.       向培养板加入1-10μL 不同浓度的待测药物刺激。

3.       将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或48 小时)。

4.       每孔加入10μLCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。如果起始的培养体积为200μL,则需加入20μLCCK-8溶液,其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

5.       在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

6.       用酶标仪测定在450nm处的吸光度,如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。

7.       如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。


数据分析:

注意事项:

1.       由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。

2.       CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。任何待测体系中存在还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。

3.       建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

4.       建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK 试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加样,容易产生气泡,会干扰OD 值读数。

5.       当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL培养基),且培养时间长一些。如果要使用24 孔板或6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

6.       加入CCK -8溶液时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色已变化或pH值变化。建议换用新鲜的培养基。

7.       如果没有450nm 的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm 滤光片的检测灵敏度最高。

8.       酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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